چگونه اسید Glutamic De Maxwellase (gad) تست های Autoantibody را بین ببریم

Assay Methodology و گزارش نتیجه

آزمون ضد جسم GAD بر روی نمونه های سرم با استفاده از سیستم عامل های معتبر ایمنی انجام می شود.سه روش اصلی بر آزمایشگاه های بالینی امروز تسلط دارند:

رادیوممونسا (RIA)

استاندارد تاریخی طلا. RIA استفاده از انسان قرمز برچسب شده با برچسب رادیویی GAD65 به autoantibodies در سرم بیمار، و پس از آن با بارش با پروتئین A. این روش حساسیت بالا و خاص بودن، اما نیاز به ایزوتوپ های رادیواکتیو و پروتکل های مدیریت تخصصی دارد. بسیاری از آزمایشگاه های مرجع به دلیل بار تنظیم کننده از RIA دور شده اند.

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

گسترده ترین فرمت موجود است. صفحات ELISA با recombinant GAD65 ثبت نام autoantibodies بیمار، که پس از آن با استفاده از IgG ضد انسان و یک بستر کروموژنیک شناسایی شده است. مدرن ELISA نشان می دهد که ضبط عالی با RIA و جلوگیری از رادیواکتیو به طور کامل.

سیستم های پیش بینی شده (LIPS)

یک رویکرد جدیدتر با استفاده از دانه های GAD65 با luciferase تزریق می شود، هنگامی که autoantibodies پروتئین فیوژن را متصل می کند، آنها با دانه های پروتئین A / G پیش بینی می شوند و فعالیت های luciferase در این گلوله اندازه گیری می شود. LIPS یک محدوده دینامیکی گسترده و از طریق ولتاژ بالا بدون تابش.

نتایج معمولا در U / mL بیان می شوند، با هر آزمایشگاه که ارزش های برش خود را ایجاد می کند، برخی آزمایشگاه ها گزارش های تیپر (به عنوان مثال، 1:10، 1:100، 1:1000) نکته مهم این است که ارزش های مطلق بین سیستم عامل ها متفاوت است و نظارت طولی باید از همان روش در سراسر استفاده کنند.

محدوده مرجع و کاهش ارزش ها

هیچ استاندارد جهانی برای مثبت بودن آنتی بادی GAD وجود ندارد، هر آزمایشگاه اعتبار فاصله مرجع خود را بر اساس جمعیت اهدا کننده سالم است.

• عدم نمایندگی: در زیر 5 U / mL برای اکثر نمونه های تجاری؛ زیر 1.0 U / mL برای روش های بسیار حساس استفاده شده در نشانه های عصبی.
• ] Borderline یا equivocal: ] 5-20 U / mL در assays مبتنی بر دیابت؛ نیاز به تفسیر محتاطانه و اغلب تکرار تست.
• بالاتر از 20 U / mL برای تست دیابت؛ بالاتر از 1.0 U / mL برای برخی از نشانه های عصبی با حساسیت بالاتر.
• مثبت: بالاتر از 100 U / mL؛ بالاتر از 1000 U / mL به شدت با سندرم های خود ایمنی عصبی مرتبط است.

شرایط عصبی، به ویژه سندرم سفت و سخت شخص، به طور معمول تولید بسیار بالا تیترهای بیش از 1000 U / mL و گاهی اوقات رسیدن به 100،000 بیمار مبتلا به دیابت نوع 1 به طور متوسط سطح بالا در محدوده 20 -200 U / mL. این تفاوت کمی کمک می کند در تشخیص تفاوت های مختلف.

تفسیر نتایج GAD Autoantibody در زمینه بالینی

نتیجه منفی

یک آزمایش ضد autoantibody منفی نشان می دهد که عدم پاسخ قابل تشخیص خود ایمنی در برابر GAD65، این یافته باید در تصویر بالینی کامل تفسیر شود.

در دیابت نوع 1 مشکوک، یک نتیجه منفی باعث می شود که خود ایمنی کلاسیک T1D کمتر احتمال دارد اما آن را به طور کامل حذف نمی کند، تقریبا 20 تا 30٪ از بیماران جدید T1D تست منفی برای آنتی بادی های GAD، یا به دلیل حساسیت غالب خود آنتی بادی های L2، ZnT8، انسولین یا آنتی بادی، به جای آن، زیرا بیماری آنها توسط سایر مکانیسم های ایمنی با حساسیت بالاتر (70٪ از حساسیت بالاتر) است.

برای علائم عصبی، یک نتیجه آنتی بادی منفی GAD احتمال سندرم های مرتبط با GAD مانند SPS یا autoimmune cerebellar ataxia را کاهش می دهد. سایر آنتی بادی های autoanti-amphiphysin، ضد-glysin، ضد-BA-A و گیرنده GABA-B، ضد DPP و نظارت بر ارائه آنتی بادی های بالینی بستگی دارد.

نتیجه مرزی یا کم-Positive

ارزش های نزدیک به آستانه برش نیاز به دقیق ترین تفسیر است. مثبت بودن سطح پایین می تواند در چندین سناریو بوجود آید:

• دیابت نوع اول در مراحل اولیه در طول فاز پیش از بیماری که در آن autoimmunity در حال ظهور است.
• شرایط عصبی میل و یا زود هنگام خود ایمنی با بار آنتی بادی پایین.
• بیماری تیروئید ایمنی، که در آن تا 10 تا 20 درصد از بیماران آنتی بادی های GAD را به عنوان بخشی از دیسیزاسیون ایمنی گسترده تر می کنند.
• بستگان درجه اول سالم بیماران T1D که ممکن است دارای تیترهای پایین بدون پیشرفت به بیماری بالینی باشند.
• افراد سالم (تقریبا 1٪ از جمعیت عمومی) بدون هیچ گونه اهمیت بالینی.

هنگامی که یک نتیجه مرزی مواجه می شود، آزمایش های تکراری پس از 3 تا 6 ماه توصیه می شود.ارزیابی همزمان سایر داروهای خودکار دیابتی (IA-2، ZnT8، autoantibodies انسولین) و یک راهنمای ارزیابی بالینی دقیق تصمیم گیری بیشتر.

نتایج مثبت بالا

یک نتیجه قوی مثبت ضد خودکشی GAD دارای ویژگی های بالا برای آسیب پذیری خود ایمنی است.اندازه ی تیترها سرنخ های تشخیصی مهمی را ارائه می دهد:

• مثبت اندیشی ( (20-200 U/mL): بیشتر با دیابت نوع 1 یا LADA سازگار است. تقریبا 70-80٪ از بیماران جدید T1D در این محدوده قرار می گیرند. Titers به طور معمول بیش از سال ها پس از تشخیص کاهش می یابد.
• مثبت اندیشی بالا (200-1000 U/mL): بین دیابت و سندرم های عصبی، بافت بالینی برای تمایز ضروری می شود.
• مثبت بودن بسیار بالا (وgt؛ 1000 U / mL): به شدت توصیه از بیماری خود ایمنی عصبی، به ویژه سندرم سفت و سخت شخص بیش از 80٪ از بیماران SPS آنتی بادی GAD در این سطوح دارند.

مثبت بودن بالا از تشخیص یک بیماری خود ایمنی حمایت می کند و اغلب تصمیمات ایمنی درمانی را در سندرم های عصبی هدایت می کند، تی پادتن ممکن است با فعالیت بیماری ارتباط داشته باشد و می تواند به طور منظم برای ارزیابی پاسخ درمان نظارت شود.

عوامل موثر در تاثیر گذار GAD Autoantibody Levels

بیماری ها و مراحل

در نوع 1 دیابت، آنتی بادی های GAD در طول زمان تشخیص بالینی و کاهش در طول سال های بعد به اوج خود رسید.پس از 5 تا 10 سال بیماری، بخش قابل توجهی از بیماران تبدیل به seronegative می شود، این الگوی زمانی بدان معنی است که دیابت طولانی مدت با آنتی بادی های منفی GAD یک غده خود ایمنی را حذف نمی کند.

در سندرم های عصبی، تیترهای آنتی بادی GAD تمایل دارند که به طور مداوم بالا بمانند، اغلب برای دهه ها برخلاف دیابت، که در آن بافت هدف به طور مداوم نابود می شود، حضور مداوم نورون های بیان شده GAD، پاسخ ایمنی را حفظ می کند.

عوامل سن و دیوگرافی

کودکان مبتلا به T1D اخیر اغلب نشان می دهند که آنتی بادی های GAD بالاتر از بزرگسالان است. سن جوان در شروع با autoimmunity تهاجمی تر ارتباط دارد، اما به طور بالینی کم است: زنان مبتلا به سندرم های عصبی خود ایمنی ممکن است کمی بیشتر از مردان داشته باشند.

Polyautoimmunity

حضور چندین آنتی بادی autoantibodies - از جمله آنتی بادی های تیروئید Peroxidase، Transglutaminase، آنتی بادی های ضد آپارتایدتال و آنتی بادی های 21 هیدروکسیلاسe - احتمال سندرم پلیاندی خود ایمنی را در این بیماران افزایش می دهد، آنتی بادی های GAD ممکن است یک جزء از یک ضد ایمنی گسترده تر به جای محرک اصلی بیماری باشد.

Assay Platform Variability

آزمایشگاه ها و روش های مختلف ارزش های مطلق مختلفی را به وجود می آورند. بیمار مورد آزمایش در دو مرکز مرجع ممکن است نتایج کمی را دریافت کند. اندازه گیری های سریال همیشه باید با استفاده از روش های مشابه انجام شود. ارتباط بالینی یک تغییر 20٪ در تیتر، اگر آسی تغییر بین اندازه گیری ها.

انجمن های بالینی مثبت GAD Autoantibodies

دیابت نوع 1 و دیابت autoimmune اواخر

آنتی بادی های GAD شایع ترین آنتی بادی در LADA را نشان می دهد، با نرخ مثبت بودن 70-90٪ بسته به جمعیت مورد مطالعه، در T1D کلاسیک، تقریبا 70٪ از بیماران Caucasian در تشخیص مثبت هستند، با نرخ پایین تر در سایر گروه های قومی.

نتیجه مثبت آنتی بادی GAD همراه با کم یا عدم وجود C- پپتیدی تشخیص دیابت خود ایمنی را تأیید می کند، این تمایز دارای پیامدهای درمانی است: بیماران نیاز به درمان انسولین دارند و نباید با ulfonylureas یا سایر ترشحات انسولین که ممکن است باعث تسریع شکست سلول بتا در دیابت مبهم بزرگسالان شود، آزمایش آنتی بادی GAD به تمایز دیابت نوع 2 و راهنمایی های مناسب کمک می کند.

نظارت سریالی روتین آنتی بادی های GAD پس از تشخیص برای مدیریت بیماری توصیه نمی شود، با این حال، آزمایش آنتی بادی می تواند به روشن کردن تشخیص در بیماران با ارائه های غیر معمول یا مسیرهای بالینی غیر منتظره کمک کند.

سندرم استف-پنرسون

سندرم استف شخص یک اختلال عصبی نادر است که با سفتی و سخت گیری پیشرفته، هیپرگارشیوز و اسپاسم عضلانی دردناک ایجاد شده توسط حرکت داوطلبانه، استرس عاطفی یا محرک های حسی غیر منتظره مشخص می شود.جیل 65 نشانه سرولوژیکی است که در بیش از 80٪ از بیماران کلاسیک SPS تشخیص داده می شود Titers به طور معمول بسیار بالا، اغلب بیش از 1000 / ml و گاهی اوقات به 1000،000 لیتر می رسد.

آنتی بادی در SPS ممکن است با شدت علائم در بیماران فردی ارتباط برقرار کند. نظارت سریال می تواند به ارزیابی پاسخ به ایمنی درمانی مانند آیمونوگلوبولی داخل وریدی (IVIG)، rituximab یا بیماران سیکلوفامید مشکوک کمک کند که آنتی بادی های GAD را آزمایش می کنند باید برای سایر آنتی بادی های autoantibodies، به ویژه ضدphiphysin، که نشان می دهد یک پاراتیو اغلب با سرطان سینه مرتبط است.

GAD Antibody-Associated Cerebellar Ataxia

دژنراسیون سابالار حاد که به عنوان گاست درaxia، سیگموس، دیستارتاریا، و پیوند اندام در هماهنگی در ارتباط با آنتی بادی های GAD رخ می دهد، این بیماران به طور معمول دارای افراد با اندازه متوسط به بالا هستند و ممکن است دیابت یا سایر ویژگی های autoimmune داشته باشند.آی.آی.آی.آی اغلب نشان می دهد که یک ایمونوتراپی است که می تواند علائم اولیه را بهبود بخشد، به ویژه در بیماران شروع کند، هنگامی که علائم اولیه را بهبود می دهد.

autoimmune Epilepsy و Limbic Enسفالی

آنتی بادی های GAD در یک زیرمجموعه از بیماران مبتلا به صرع موقت جدید، به ویژه کسانی که دارای تشنج های مقاوم در برابر دارو هستند، هنگامی که همراه با کاهش شناختی و علائم روانپزشکی، ارائه نشان می دهد که آر ام آر آی مغز ممکن است بیش از حد در لوب های زمانی رسانه ای شدت نشان دهد.

سایر انجمن های autoimmune

سطح آنتی بادی GAD پایین به متوسط در طیف وسیعی از شرایط خود ایمنی دیگر، اغلب به عنوان یافته های اتفاقی ظاهر می شود:

• تیروئیدی خود ایمنی (بیماری هیشیموتو، بیماری Graves)
• گلیسمی شدید
• وییلیگو
• نارسایی آدرنال اولیه (بیماری اضافی)
• سندرم پلیاندوسرین خودکار ایمنی نوع 2 (سنزوم)
• نارسایی تخمدان
• تراپیست های خودکار

در این تنظیمات، آنتی بادی های GAD ممکن است حساسیت گسترده تری به خود ایمنی را به جای نقش مستقیم بیماری زا نشان دهند. بیماران مبتلا به آنتی بادی های GAD تصادفی باید برای پیشرفت به دیابت یا علائم عصبی تحت نظارت قرار گیرند.

محدودیت ها و Pitfalls در تفسیر ضد بدن GAD

نتایج مثبت کاذب

آنتی بادی های GAD در حدود 1 تا 2 درصد از جمعیت سالم ظاهر می شوند.

• آنتی بادی های فعال از سایر شرایط خود ایمنی
• برخی از عفونت های ویروسی، به ویژه عفونت های وارد شده، که ممکن است باعث تولید خودکار ضد بدن ترانسی شود
• آثار فنی آزمایشگاهی، به ویژه با پلتفرم های قدیمی تر Assay

یک نتیجه کوچک مثبت باید قبل از تصمیم گیری بالینی با آزمایش تکرار شود.

نتایج منفی کاذب

منفی های کاذب در چندین سناریو رخ می دهد:

• مرحله T1D با سطح آنتی بادی کاهش
• پاسخ های ضد بدن به جای GAD67، که تعداد کمی از آنها تشخیص می دهند
• ویژگی های اپیتوپی که توسط آنتی ژن های رتینوئیستی که در آن ها استفاده می شود، به دست نمی آید.
• ایمنی درمانی که تولید آنتی بادی را کاهش می دهد
• موارد نادر بیماری خود ایمنی منفی توسط ایمنی سلولی بدون پاسخ طنز

نتیجه آنتی بادی منفی GAD بیماری خود ایمنی را حذف نمی کند، در مظنون T1D با آنتی بادی های منفی GAD، آزمایش اضافی برای IA-2، ZnT8 و انسولین autoantibodies ضروری است.

Titer و Clinical Severity Discordance

در حالی که افراد بسیار بالا به شدت etiology خود ایمنی را پیشنهاد می کنند، تیتر مطلق همیشه با شدت علائم ارتباط مستقیم ندارد، برخی از بیماران مبتلا به SPS دارای تیترهای بسیار بالا اما علائم نسبتا خفیف هستند، در حالی که دیگران با افراد متوسط تجربه ناتوان کردن بیماری بالینی و وضعیت عملکردی راهنماهای اولیه برای تصمیم گیری های درمانی باقی می مانند، با آنتی بادی هایی که به عنوان داده های حمایتی خدمت می کنند.

رویکرد عملی به نتایج GAD Autoantibody

هنگامی که با یک آزمایش آنتی بادی مثبت یا مرزی مواجه می شوید، پزشکان باید یک رویکرد سیستماتیک را دنبال کنند:

1. نتیجه را تقویت کنید: [FLT 1 ] برای خط مرزی یا نتایج غیرمنتظره، تست را با استفاده از همان روش پیش بینی قبل از تصمیم گیری بالینی تکرار کنید.
2. زمینه بالینی را به طور کامل ارزیابی کنید: برای علائم هیپرگلیسمی (polyuria، Polydipsia، کاهش وزن)، یافته های عصبی (rigidity، اسپاسم، آتاکسی، تشنج)، و سابقه خانوادگی بیماری خود ایمنی.
3. ] آزمون های تشخیصی حمایتی: برای دیابت مشکوک: گلوکز ناشتا، HbA1c، C- پپتید و داروهای اضافی دیابت autoantibodies (IA-2، ZnT8، انسولین) برای ارائه های عصبی: مغز با پروتکل صرع، EEG، سوراخ کمر با تجزیه و تحلیل CSF برای آنتی بادی های GAD و التهابی و یک پانل ضد نورون.
4. ]Screen برای autoimmunity مشترک: Thyroid تست عملکرد با آنتی بادی تیروئید Peroxidase، سطح ویتامین B12، کورتیزول صبحگاهی، آنتی بادی های ضد تشنج و آنتی بادی های ضد آپارتاید سلول را همانطور که توسط علائم نشان داده شده است، آزمایش می کند.
5. مشاوره تخصصی: [FLT 1] به endocrinology برای مدیریت دیابت و نورولوژی برای سندرم های عصبی اشاره می کند.